펩타이드 품질 검증을 위한 HPLC 및 질량 분석법

HPLC는 일반적으로 펩타이드 관련 성분을 분리하고 크로마토그래피 순도를 추정하는 데 사용되는 반면, 질량 분석법은 질량 대 전하 비율 데이터를 평가하여 분자 정체성을 확인하는 데 활용됩니다. 따라서 어느 한 방법만으로는 완전한 품질 평가로 간주되어서는 안 됩니다. 대신, 결과는 펩타이드 서열, 염 형태, 규격 및 시험 방법을 종합적으로 고려하여 해석해야 합니다.

HPLC 및 질량 분석법

HPLC는 무엇을 보여주는가?

고성능 액체 크로마토그래피는 시료 성분들이 고정상과 이동상과의 상호작용에 따라 분리됩니다. 따라서 분석법이 적절한 분리 성능을 보일 경우, 대상 펩타이드와 관련 불순물들이 서로 다른 크로마토그래피 피크로 나타날 수 있습니다.

USP 일반장 <621> 이 책에서는 정성 및 정량 분석에 사용되는 크로마토그래피 기법 중 하나로 HPLC를 다루고 있으며, 시스템 적합성 개념에 대해서도 설명하고 있다.

그러나 HPLC 면적 백분율은 다음을 자동으로 나타내는 것은 아닙니다:

  • 절대 펩타이드 함량;
  • 바이알 충전 정확도;
  • 불임;
  • 내독소 농도;
  • 분자적 정체성;
  • 잔류수;
  • 반이온 함량.
대량 펩타이드 공급

질량 분석법은 무엇을 보여주는가?

질량 분석법은 이온의 질량 대 전하 비율을 측정하여 분자 정보를 제공합니다. 따라서 관측된 질량을 펩타이드 서열과 변형 정보를 바탕으로 계산된 예상 질량과 비교할 수 있습니다.

그럼에도 불구하고, 보고된 질량은 다음과 같은 요인의 영향을 받을 수 있습니다:

  • 전하 상태;
  • 부가체 형성;
  • 반이온;
  • 동위원소 분포;
  • 산화 또는 분해;
  • 터미널 수정;
  • 공액 표지;
  • 기기 및 처리 설정.

HPLC와 MS 비교

분석 분야HPLC질량 분석법
주요 역할성분 분리 및 순도 추정분자량 및 물질 정체성 근거
일반적인 출력크로마토그램 및 피크 면적 데이터질량 스펙트럼 및 관측된 이온 데이터
다음에 유용합니다순도, 불순물 프로파일 및 일관성예상 질량 및 구조적 확인
주요 한계그 자체만으로는 동일성을 증명하지 못한다크로마토그래피적 순도만으로는 입증되지 않는다
모범 사례 결과는 사양 및 방법과 함께 해석된다.

HPLC 보고서에서는 무엇을 검토해야 할까요?

보고서 요소그것이 중요한 이유
시료 식별보고서를 테스트 대상 배치와 연결합니다.
칼럼 및 방법분석적 맥락을 제공한다
검출 파장기록된 신호의 응답에 영향을 미칩니다
체류 시간피크 비교 기능 지원
피크 면적 비율크로마토그래피 순도 계산 기능을 지원합니다
통합피크 경계가 어떻게 지정되었는지 보여줍니다
시스템 적합성분석 중 메서드 성능 지원
HPLC 및 질량 분석법

분석 방법 검증

분석 방법은 그 용도에 따라 설계되고 검증되어야 한다. 따라서 검증 계획에는 성분, 함량, 순도, 불순물 또는 기타 관련 특성 등 측정 대상인 구체적인 품질 특성이 반영되어야 한다.

ICH Q2(R2)는 특이도 또는 선택성, 정확도, 정밀도, 보고 가능 범위 등 주요 성능 특성을 규정하고 있습니다. 또한, 시스템 적합성 평가를 통해 분석 성능을 정기적으로 점검하며, 견고성은 일반적으로 방법 개발 단계에서 평가되어 사소한 절차상의 변동이 결과에 유의미한 영향을 미치지 않는지 확인합니다.

자주 묻는 질문

HPLC 및 질량 분석법

98% HPLC 분석 결과가 해당 바이알에 중량 기준으로 98% 펩타이드가 함유되어 있음을 의미합니까?

꼭 그렇지는 않습니다. HPLC 면적 백분율과 순 펩타이드 함량은 서로 다른 측정값입니다.

MS는 분자의 정체성을 강력하게 뒷받침할 수 있지만, 완전한 서열 확인을 위해서는 분자 및 프로젝트에 따라 추가적인 방법이 필요할 수 있습니다.

기둥, 구배, 파장, 적분 설정, 기기 및 시료 전처리에 따라 결과가 달라질 수 있습니다.

네. 해당 보고서는 실제로 검사된 배치까지 추적 가능해야 합니다.

이용 가능한 분석 데이터 요청

선택하신 제품에 대해 HPLC 크로마토그램, 질량분석 데이터, 시험 방법 또는 배치별 분석 기록이 있는지 문의해 주십시오.

CTA