Serviços de modificação de péptidos para investigação especializada
Podem ser introduzidas modificações nos péptidos para alterar a carga terminal, a estrutura, a visibilidade analítica, o comportamento de conjugação, a solubilidade, a estabilidade ou a compatibilidade experimental. Após a avaliação da viabilidade da sequência, podem ser fornecidas determinadas alterações terminais, marcadores fluorescentes, marcadores de afinidade, estratégias de ciclização, ligantes, cadeias de PEG, grupos lipídicos e aminoácidos não padrão.
Por que razão se modifica um péptido?
Um péptido linear padrão pode não possuir todas as propriedades necessárias para uma determinada experiência. Por conseguinte, pode ser introduzido um grupo funcional para que o péptido possa ser detetado, imobilizado, conjugado, ciclizado, estabilizado ou diferenciado analiticamente.
No entanto, cada grupo ligado altera a estrutura molecular. Consequentemente, o peso molecular, a hidrofobicidade, a carga, a solubilidade, o comportamento durante a purificação e a resposta analítica também podem ser alterados.
A Bachem e a GenScript enumeram modificações como acetilação, amidação, biotinilação, corantes fluorescentes, ciclização, PEGilação, grupos de química «click», fosforilação, lipidação, marcação isotópica e conjugação com transportadores entre as opções disponíveis no mercado.
Categorias de modificação
Alterações no terminal
Podem ser consideradas a acetilação do extremo N-terminal, a amidação do extremo C-terminal, a ligação de ácidos gordos terminais e determinados grupos terminais.
Marcadores fluorescentes e de afinidade
Podem ser introduzidos biotina, FAM, FITC, TAMRA, rodamina ou outros marcadores compatíveis.
Alterações estruturais
Podem ser avaliadas a ciclização por pontes dissulfureto, a ciclização «cabeça-cauda», a ciclização de cadeias laterais ou estruturas restritas.
Modificações químicas
Podem ser consideradas a fosforilação, a metilação, a PEGilação, a lipidação, a marcação isotópica, os aminoácidos D e os aminoácidos não naturais.
Grupos reativos e ligantes
Podem ser incorporados grupos azida, alcino, maleimida, cisteína, Ahx e outros espaçadores.
Conjugação de portadores
Podem ser utilizados KLH, BSA, OVA ou outro veículo tecnicamente adequado, quando aplicável.
Guia de Seleção de Modificações
| Objetivo da investigação | Possível alteração |
|---|---|
| Reduzir a taxa de terminal | Acetilação ou amidação |
| Ativar a deteção de fluorescência | FAM, FITC, TAMRA ou outro corante |
| Suporte à captura por afinidade | Estrutura da biotina ou do ligante de biotina |
| Ativar a ligação à operadora | Conjugação com cisteína, ligante ou transportador |
| Controlar a conformação do péptido | Ciclização |
| Aumentar o tamanho hidrodinâmico | PEGilação |
| Aumentar a associação à membrana | Lipidação |
| Apoio ao rastreio analítico | Marcação com isótopos estáveis |
| Ativar a química de clique | Grupo azida ou alcino |
Como é gerido um projeto de peptídeos modificados?
O objetivo da investigação está definido
Em primeiro lugar, é explicada a função pretendida com a modificação, tal como a deteção, a conjugação, o controlo estrutural, a solubilidade ou a rastreabilidade analítica.
A posição do acessório está selecionada
Em seguida, é selecionado o extremo N-terminal, o extremo C-terminal ou uma cadeia lateral específica.
São analisados os requisitos do ligador
Sempre que necessário, pode ser adicionado um espaçador, de modo a reduzir a interferência estérica entre o péptido e o grupo ligado.
Aviabilidade é avaliada
Em seguida, são analisados os efeitos da modificação na carga, na hidrofobicidade, no rendimento da síntese, na solubilidade e na purificação.
São selecionados os métodos analíticos
Pode optar-se por HPLC, MS, deteção por UV, análise de aminoácidos ou outro método acordado, consoante a estrutura modificada.
A especificação final foi aprovada
Por fim, são confirmados a sequência, a modificação, a posição, o ligante, a pureza, a quantidade e o pacote analítico.
Discuta o seu projeto de péptido modificado
Indique a sequência, a modificação, a posição de ligação, os requisitos do ligante, a pureza, a quantidade e a aplicação na investigação.